Taking of samples for histopathology and cytology

Histopathological examination

Samples of tissue of apropriate size (1-3 cm3) are "fixed" to preserve the cells/tissue in as natural a state as possible and prevent postmortem decay (autolysis and putrefaction). Even the most careful fixation alters the sample to a certain extent and may potentially introduce artifacts that can interfere with interpretation of images of the fine detail of cells, incl. all their organelles, that can only be observed using an electron microscope .

Fixation is usually the first stage in a multistep process to prepare biological material for microscopy or other analysis, the choice of fixation method and specific fixative may depend on the subsequent processing steps appropriate in that particular case.

Chemical fixation
In this case biological structures are preserved in a state as close to that of the living tissue as possible. This requires a chemical fixative that can stabilise the proteins, nucleic acids and mucosubstances of the tissue by making them insoluble. The fixative of choise is 10% buffered formalin. Preparation of this solution is very eaesy. You can bay aprox. 40% formalin in the drugstore. This 40% solution must be diluted ten times i. e. add 9 parts of tap water to one part of 40% formalin. Amount of diluted formalin solution depends on the size of the sample. This should be at least 1:20, i. e. sample of size 1 cm3 (= 1 ml) will be put to the 20 ml of fixative. Time of fixaton is 24 hours and must be send to the pathologist with properly filed request form.

Frozen sections
Small pieces of tissue (typically 5mm x 5mm x 3 mm) are placed in a cryoprotective embedding medium then snap frozen in isopentane (an alkane) cooled by liquid nitrogen. Tissue is then sectioned in a freezing microtome or cryostat. Sections are then fixed by immersion in a specific fixative or series of fixatives for carefully controlled period of time. 

Cytologické vyšetření

FNAB (fine needle aspiration biopsy). Pro odběr použije jehlu vělikosti 20-23G. Jehlu zavádějte v několika směrech, vysunujte (pochopitelně ne úplně) a zasunujte na různých místech aby byl vzorek representativní. Ihned po odběru rozetřete odebraný materiál na 3-5 sklíček podobně jako krevní nátěr nebo tzv. "squash" technikou (na podložní sklo s odebraným materiálem položte další podložní sklo, jemně přitlačte k sobě a horní sklo jemně sesuňte po celé délce spodního sklíčka) a osušte, nelépe fénem (z větší vzdálenosti, aby se buňky nepoškodily vysokou teplotou).
 
Zasíláte-li podložní skla spolu se vzorky pro histopatologické vyšetření nesmíte je dát do stejného obalu aby se vyloučilo působení formalínu na cytologický preparát. Sklíčka nebarvěte, budou obarveny v laboratoři standardní technikou. Sklíčka jasně označte, nejlépe písmeny aby se dalo rozpoznat na které ploše jsou buňky. Je nevhodné provádět FNAB z nádorů mléčné žlázy, jen zřídka bývají diagnostické, preferujte prosím histopatologické vyšetření.
 
Bronchoalveolární laváže a efuse zasílejte ve dvou EDTA zkumavkách, budou centrifugovány v laboratoři. Do druhé přidejte kapku 10% formalínu a poznačte to na zkumavku, bude použito jiné barvení. Stěry z tracheálních kanyl rozetřete na podkožní sklo a osušte viz výše.
 
CSF. Nechte odkápnou první kapky CSF kontaminované krví, dva vzorky odeberte do EDTA zkumavek, do druhé z nich přidejte kapku 10% formalínu. Chcete-li posoudit CSF při fokální míšní lézi, odeberte vzorek kaudálně za touto lézí, tedy z lumbální cisterny.

Taking of sample for cytology

Adresa
Vrchlického 230, 533 45 Čeperka
Telefon
+420 725 485 828